अमीषा ने अपने अभिनय करियर की शुरुआत सत्यदेव दुबे के थिएटर ग्रुप से की थी। उन्होंने नाटकों में अभिनय किया, जिसमें वह, नीलम (1999) नामक एक उर्दू भाषा के नाटक में भी शामिल थीं, जिसे तनवीर खान ने लिखा। इसके बाद अमीषा ने मॉडलिंग का रुख किया। अमीषा पटेल ने इसके बाद वर्ष 2001 में सनी देओल के साथ 'गदर: एक प्रेम कथा' में काम किया। फिल्म में अपने दमदार अभिनय के लिए अमीषा सर्वश्रेष्ठ अभिनेत्री के फिल्मफेयर पुरस्कार के लिये नामांकित की गईं।
वर्ष 2002 में प्रदर्शित फिल्म ‘हमराज’ में अमीषा पटेल के अभिनय का नया रूप दर्शकों को देखने को मिला। इस फिल्म के लिए उन्हें एकबार फिर से सर्वश्रेष्ठ अभिनेत्री के फिल्म फेयर पुरस्कार के लिए नामांकित किया गया। इसके बाद अमीषा ने ये है जलवा, परवाना, एलान, जमीर, वादा जैसी कई असफल फिल्मों में काम किया।
वर्ष 2005 में अमीष पटेल को आमिर खान के साथ ‘मंगल पांडे’ में काम करने का अवसर मिला हालांकि यह फिल्म टिकट खिड़की पर कोई खास कमाल नहीं दिखा सकी। वर्ष 2007 में प्रदर्शित फिल्म हनीमून ट्रैवलस प्रा. लिमिटेड अमीषा पटेल के करियर की एक और हिट फिल्म साबित हुई। इसके बाद अमीषा ने भुल भुलैया और रेस-2 जैसी सुपरहिट फिल्मों में भी अभिनय किया।
अमीषा पटेल ने अपने सिने करियर में हिंदी के अलावा तमिल और तेलुगु फिल्मों में काम किया है। वर्ष 2023 में, अमीषा पटेल ने 'गदर 2' के साथ सफल वापसी की, जो उनकी पहले की हिट 'गदर: एक प्रेम' कथा की सीक्वल थी।
